通常的鉬釩酸顯色液由多個組份組成，必須在使用前進行配制，并且容易產生沉淀，使用相對不太方便，并且也容易導致檢測結果不太穩(wěn)定。本鉬釩酸顯色液采用了新的TMB顯色技術，把所有的相關試劑全部配制在一個溶液中，僅由單一溶液組成，簡化了操作步驟，并且使檢測結果更加穩(wěn)定可靠。

 

　　使用之前，以超純水反復洗滌的適當容器，倒出適量單組分鉬釩酸顯色液，待溶液達到室溫即可使用。加液：加完HRP結合物并溫育一定時間后，洗板3－5次，每孔加TMB底物100－150uL，37°C溫育15－30分鐘。 

 

　　終止（備選）：加等體積的1N的HCl或者2N的H2SO4來終止反應。酶標孔中反應液從藍色變?yōu)辄S色。讀數(shù)：終止反應后，30分鐘內在450nm處讀數(shù)。不加終止液，顯色更加穩(wěn)定，可以在620－650nm處讀數(shù)。 

 

　　注意： 

 

　　降低底物強度：如果出現(xiàn)高的反應背景和/或沉淀，表明鉬釩酸顯色液反應過于強烈。為了避免產生沉淀，可以在加入終止液后馬上讀數(shù)；另外，可以進一步稀釋一抗和/或HRP結合物。為了降低非特異性背景顏色，空白進一步降低一抗和/或HRP結合物的濃度，盡量避免降低底物濃度。